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O
cromosoma artificial bacteriano
(
CAB
ou, en ingles,
BAC
) e un
vector de clonacion
usado para clonar fragmentos de
ADN
(de 100 a 300
kb
de tamano; como media 150 kb)
[
1
]
na bacteria
Escherichia coli
, creado a partir do
plasmido
factor F
encontrado de modo natural na mencionada
bacteria
[
2
]
[
3
]
.
E un dos tipos de vectores de clonacion conecidos como "vectores de alta capacidade", entre os que ademais se incluen os
cosmidos
,
PACs
(cromosoma artificial derivado do ADN do bacteriofago P1) e YACs (
cromosoma artificial de levedo
), por contraposicion cos "vectores de baixa capacidade", como
plasmidos
, vectores derivados do
fago lambda
,
faxemidos
e
fosmidos
.
Os cromosomas artificiais bacterianos son moi utilizados como vectores de clonacion para a construcion de
xenotecas
(bibliotecas xenomicas), como no
Proxecto Xenoma Humano
. A sua frecuente utilizacion debese a sua notable capacidade, grande estabilidade e baixa porcentaxe de
quimerismo
. Tamen se usan no estudo de enfermidades hereditarias e para a clonacion de xenomas de axentes infecciosos como virus
[
4
]
[
5
]
[
6
]
.
Dado o gran tamano dos CAB (ou BAC) recombinantes, as estratexias para a sua introducion na celula mais eficientes son as que utilizan a
electroporacion
(aplicanse correntes electricas a membrana celular para que se formen poros que permitan o paso de substancias).
Un cromosoma artificial bacteriano tipico consta de:
Para realizar a
clonacion
dun xene hai que seguir o seguinte procedemento:
- a) Cortase o vector co
encima de restricion
HindIII
para abrir o
plasmido
e facelo linal.
- b) Desfosforilanse os extremos 5’ do vector para evitar a autoligacion.
- c) Dixirese a nosa mostra con HindIII ou outro encima compatible. Seleccionanse os fragmentos segundo o seu tamano por
electroforese
e purificanse.
- d) Levase a cabo a reaccion de ligacion.
- e) Transfirense os vectores a unha celula por
electroporacion
.
- f) Seleccion dos clons nun medio con
cloranfenicol
e
X-gal
. Son positivos os que sobreviven en
cloranfenicol
e carecen de actividade de
beta-galactosidase
.
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